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法規內容

法規名稱: 文心蘭種苗病毒驗證作業須知
公發布日: 民國 91 年 03 月 12 日
廢止日期: 民國 106 年 05 月 08 日
發文字號: 防檢三字第1061488353A號 令
法規體系: 植物防檢疫
圖表附件:
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一、行政院農業委員會(簡稱農委會)動植物防疫檢疫局(簡稱防檢局)
  為防止病毒病藉由文心蘭種苗傳播蔓延,以提昇文心蘭種苗及其產品
  品質,特依據「植物種苗疫病蟲害驗證輔導要點」第三點訂定本須知
  。


二、本須知用詞定義如下:
(一)文心蘭,指蘭科(Orchidaceae)中之文心蘭屬(Oncidium)、蜘蛛
   蘭屬(Brassia)、堇花蘭屬(Miltonia)、齒舌蘭屬(Odontoglossum)
   與相關屬及其雜交種之植物。
(二)病毒,指會感染文心蘭之胡瓜嵌紋病毒(Cucumber mosaic virus,
   簡稱CMV)、蕙蘭嵌紋病毒(Cymbidium mosaic virus,簡稱 CymMV
   )及齒舌蘭輪斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,簡稱 ORSV
   )(附錄一)。
(三)種苗,指以組織培養技術經由分生組織培養所形成之分生苗及其定
   植苗。


三、為辦理文心蘭種苗病毒驗證業務,防檢局委託農委會種苗改良繁殖場
  (簡稱種苗場)為受理機關,負責申請案之受理及發證事宜;委託農
  委會臺中區農業改良場、農委會臺南區農業改良場及種苗場為檢查機
  關,負責繁殖圃之設置、操作管理及種苗查驗等檢查工作;委託農委
  會農業試驗所或經防檢局認證核可之機關(構)為檢定機關,負責病
  毒之檢定工作。


四、得申請病毒驗證之種苗,包含組織培養瓶苗(簡稱瓶苗)及組織培養
  定植苗(簡稱定植苗)。申請瓶苗驗證者,應於母本進行初代無菌化
  分生繁殖前提出;申請定植苗驗證者,若源自瓶苗者,應於瓶苗出瓶
  定植前提出,若源自定植苗者,應於移植換盆前提出申請。母本及各
  階段種苗之檢查時間,申請者應於申請書中載明。


五、申請種苗病毒驗證者,應填具申請書,向受理機關提出申請,並繳交
  檢查費。驗證結果於申請者繳交檢定費後由受理機關通知,符合規定
  之種苗另核發證明書。


六、各級繁殖圃設置及操作管理應符合下列規定:
(一)母本保存園
  1.設置條件:母本應隔離栽培於具阻隔病毒媒介昆蟲及軟體動物入侵
   功能之設施內。
  2.操作管理:
  (1)母本應在申請驗證前移入符合規定之母本保存園內。母本單株應
      標示品系並獨立編號,植株間不得相互接觸。
  (2)母本保存園應與其他培養場區隔,並嚴格控管人員出入,避免任
    何人為接觸造成感染之機會。栽培期間使用之盆缽、介質、器具
    及花梗固定用器材等,應採用全新資材。
   (3)培育過程中植株若需修剪或整理,使用之工具應經附錄二所述方
    式消毒,並以單株單剪方式為之,以避免植株間之相互污染。
   (4)母本保存園應定期施行防治病毒媒介昆蟲及軟體動物之措施。
   (5)母本保存園應建立管理紀錄,記錄母本之種植日期及病蟲害防治
    措施等資料,供檢查人員現場查驗時參考。
(二)組織培養場
  1.設置條件:生產瓶苗之組織培養場(簡稱組培場),應具備高溫高
   壓消毒設備、置放瓶苗之培養空間、繁殖無病毒瓶苗之無菌操作台
   及相關儀器設備。
   2.操作管理:組培場管理人員應記錄母本之編號、瓶苗生產數量及批
   號。瓶苗各繁殖階段之管理應符合以下規定:
   (1)進入組織培養繁殖之初代培養植體,應延續母本編號給與適當批
    號以利追蹤,各繼代增殖瓶苗亦同。屬於同一品系不同單株所誘
    發產生之培養植體,在母本擁有者與組培場雙方共識下,得混合
    成為單一母瓶或重複母瓶,並分別予以適當編號,其數目由雙方
    決定並告知受理單位,以為後續採樣之依據。
   (2)為建立組織培養母瓶所進行之植物材料消毒與接種,及各階段繼
    代增殖作業,應於繁殖無病毒瓶苗之無菌操作台內進行。
   (3)繁殖無病毒種苗之無菌操作台內所使用之工具應經附錄二所述方
    式消毒。工具與操作盤應隨材料批號更換。操作人員工作前應行
    必要之消毒以避免病原污染。
   (4)組培場應建立管理紀錄,記錄母瓶及各繼代增殖子瓶瓶苗之移植
    日期等資料,供檢查人員現場查驗時參考。
(三)定植苗培養場
  1.設置條件:申請定植苗病毒驗證之定植苗培養場設施,應具阻隔病
   毒媒介昆蟲及軟體動物入侵之功能。
  2.操作管理:
   (1)瓶苗定植過程若需浸泡殺菌藥劑或洗滌,同一批號瓶苗以使用經
    消毒處理之單一容器為限,不同批號不得混用。
   (2)同一批待驗證瓶苗或定植苗之移植應由專人負責,並不得與其他
    非驗證瓶苗或定植苗之移植混同進行。
   (3)移植操作應在消毒工作台上進行,並以新鮮配製之千分之五至千
    分之六次氯酸鈉溶液處理台面一分鐘以上,再以乾淨紙巾擦乾。
   (4)操作人員應著專用工作服,進行移植操作前應以肥皂充分洗手,
    完成不同批號之瓶苗或定植苗定植後,應重複前述之台面消毒處
    理及充分洗手後方能進行其他批號種苗之移植。工作服應每日更
    換,並應以千分之五至千分之六次氯酸鈉溶液處理一分鐘以上後
    清洗。
   (5)瓶苗或定植苗移植時應使用全新盆缽及栽培介質。移植後之定植
    苗應整齊排列於植床上,避免葉片重疊,並明確標示來源批號、
    移植日期及數量,且應依一般預防病毒傳播之要領進行栽培管理
    。
   (6)定植苗培養場應建立管理紀錄,記錄定植苗之定植日期及病蟲害
    防治措施等資料,供檢查人員現場查驗時參考。


七、病毒檢定種類、檢查程序及檢查方法規定如下:
(一)病毒檢定種類
  1.母本:ORSV、CymMV 及 CMV。
  2.瓶苗:ORSV 及 CymMV。
  3.定植苗:ORSV 及 CymMV。
(二)檢查程序及方法
  1.母本
   (1)母本保存園之設置及操作管理應符合第六點第一款規定,經檢查
    人員檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。
   (2)母本應進行二次檢定,間隔一至二個月,第一次檢定符合分級標
    準規定者始得進行第二次檢定。第一次檢定採用酵素聯結抗體免
    疫測定法(簡稱 ELISA),第二次檢定採用反轉錄聚合酶連鎖反
    應法(簡稱 RT-PCR)
   (3)檢查人員進行採樣時,應以單株為單位,切取適量葉片及根部,
    置於封口塑膠袋中,標明植株號碼後送交檢定機關進行病毒檢定
    。採樣時各單株應使用單一工具。
   (4)檢定機關應於檢定完成後五個工作日內,將結果通知檢查機關及
    受理機關。受理機關應於接獲檢定結果五個工作日內,通知申請
    者繳交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知。
   (5)申請者應將各檢定階段確認感染病毒之母本立即移出保存園,檢
    查人員應擇期前往現場確認,未依規定移除感染母本者,即終止
    該申請案之後續驗證程序。
  2.瓶苗
   (1)組培場之設置及操作管理應符合第六點第二款規定,經檢查人員
    檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。
   (2)檢查人員以母瓶編號為單位,抽取各母瓶內瓶苗送交檢定機關進
    行病毒檢定,每一母瓶編號至少抽取一瓶,每一母瓶逢機抽取五
    個培植體混合為一個樣品,檢定方法採用 RT-PCR。
   (3)檢定機關應於完成母瓶瓶苗檢定後五個工作日內,將結果通知檢
    查機關及受理機關。受理機關應於接獲檢定結果五個工作日內,
    通知申請者繳交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知。組培
    場應於接獲結果通知後立即將不符分級標準規定之母瓶批號移除
    ,始得進行符合分級標準規定批號之繼代增殖及後續驗證程序。
   (4)申請者若委託不同組培場進行繼代繁殖,應於申請時註明,且繼
    代繁殖組培場之設置及操作管理亦應先經檢查人員查證,符合第
    六點第二款規定者,始得進行後續驗證程序。
   (5)組培場完成子瓶繼代繁殖後,應主動通知受理機關安排檢查時程
    。進行子瓶瓶苗之檢查時,檢查人員應核對合格母瓶編號,並抽
    樣送檢定機關進行檢定。每一編號至少抽取三個子瓶,每一子瓶
    逢機抽取五個植體混合為一個樣品,檢定方法採用RT-PCR。
   (6)檢定機關應於完成檢定後五個工作日內,將結果通知檢查機關及
    受理機關。受理機關應於接獲結果五個工作日內,通知申請者繳
    交檢定費,並於繳費完成後,始核發結果通知,符合規定之種苗
    另核發證明書。
  3.定植苗
   (1)定植苗培養場之設置及操作管理應符合第六點第三款規定,經檢
    查人員檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。採樣檢定時間由申
    請者自行預估並於申請書中載明,若有變動應立即通知受理機關
    。
   (2)定植苗之檢查,由檢查人員抽樣送檢定機關進行檢定,定植苗若
    領有病毒驗證分級證明之瓶苗者,抽樣比例為千分之五,若未領
    有病毒驗證分級証明者,抽樣比例百分之一,檢定方法採用 ELISA
    。
   (3)檢定機關應於完成檢定後五個工作日內,將結果通知檢查機關及
    受理機關,受理機關應於接獲結果五個工作日內,通知申請者繳
    交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知,符合規定之種苗另
    核發證明書。


八、驗證標準及有效期限規定如下:
(一)瓶苗
  1.母本保存園及組培場之設置及操作管理應符合本須知之規定,並由
   檢查人員現場查驗確認。經過二次檢定結果均未檢測出 CymMV 及
   CMV 二種病毒之母本單株,始得進行分生繁殖。
  2.母瓶瓶苗及其所增殖之子瓶瓶苗,經RT-PCR方式檢定結果符合病毒
   感染分級標準者,發給病毒檢定證明書。驗證有效期限為自發證日
   起三個月。
  3.母瓶瓶苗及其所增殖之子瓶瓶苗,檢定之病毒感染分級標準如下:
   (1)特優:無 CymMV 及 ORSV 病毒。
   (2)優良:無 CymMV 病毒。
(二)定植苗
  1.定植苗培養場之設置及操作管理應符合本須知之規定,並由檢查人
   員現場查驗確認,始得進行後續之檢查與抽樣檢定。
  2.定植苗經檢查人員抽樣並送交檢定機關檢定,依檢定結果符合病毒
   感染分級標準者,發給病毒檢定證明書,驗證有效期限為自發證日
   起三個月。
  3.檢測之病毒感染分級標準如下:
   (1)特優:無 CymMV 及 ORSV 病毒。
   (2)優良:無 CymMV 病毒。
   (3)標準:所抽驗之樣品中 CymMV 病毒感染率低於百分之五。


九、收費規定如下:
(一)檢查費:每件申請案收取一千元。
(二)檢定費:依所採用檢定方法及所抽檢樣品數核計;每件母本樣品包
    含 CymMV、ORSV 及 CMV 三種病毒之檢定,採用 ELISA 者收取三
   十元,採用RT-PCR者收取三百元。前項費用之收支依照預算程序辦
    理。


十、為鼓勵文心蘭組培場及定植苗培養場申請種苗病毒驗證,防檢局得成
  立評選委員會,評選優良之「文心蘭種苗病毒驗證示範生產場」。